Dermis acelular porcina (sus scrofa) cargada con antioxidantes de larrea divaricata

Porcine (sus scrofa) acellular dermis load with antioxidants from larrea divaricata

Autores | Contacto

A M Stella *, H Mattes Fernández **, D Estomba ***, H Drago **** y E Mansilla *****

* Laboratorio de Ecoporfirinas. Profesor Adjunto. Departamento de Química Biológica. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Investigador del CONICET. e-mail:anamariastella@ecoporfirinas.com.ar.
** Profesor de Fisiología Vegetal y Secretario de Investigación del Asentamiento Universitario de San Martín de los Andes. Universidad del Comahue. email: hernanmattes@yahoo.com.ar.
*** Investigador del Asentamiento Universitario de San Martín de los Andes. Universidad del Comahue. email: diegoestomba@yahoo.com.
**** Médico Cirujano del Hospital del Quemado. Buenos Aires. e-mail: hdrago@fibertel.com.ar.
***** Jefe de Banco de Tejidos del Hospital del Quemado. Médico Cirujano Plástico. e-mail: edmansil@netverk.com.ar.

Dirección
Prof. Dr. Ricardo E. Achenbach

Resumen | Palabras Claves

RESUMEN: Con el objeto de cargar con antioxidantes de Larrea divaricata una dermis acelular porcina para propósitos terapéuticos, se determinó el contenido de polifenoles y antocianinas de extractos puros, aislados y absorbidos en una dermis acelular porcina. Los valores para polifenoles totales y antocianinas fueron: a) Larrea divaricata: 58,77 + 1,55 mg ácido gálico / 100 g peso fresco, 400,00 + 9,55 mg cianidina 3-glucósido / 100 g peso fresco, repectivamente, b) dermis acelular porcina: 8,86 + 0,55 mg ac. gállico / 100 g peso fresco y 0,10+ 0,00 mg cianidina 3-glucósido / 100 g peso fresco; respectivamente, c) Larrea divaricata absorbida en dermis acelular porcina 45,92 + 0,90 mg ácido gálico / 100 g peso fresco y 155,92 + 5,90 mg cianidina 3-glucósido / 100 g peso fresco, respectivamente. Nosotros concluimos que es posible tener una dermis acelular porcina cargada con antioxidantes de Larrea divaricata para propósitos médicos.

PALABRAS CLAVE: Polifenoles; Antocianinas; Matriz epidérmica; Larrea divaricata; Antioxidantes.

SUMMARY: The aim of the study was to evaluate loading with antioxidants from Larrea divaricata a porcine acellular dermis for therapeutic purposes, poliphenols and anthocianins of pure extracts, isolated and absorbed in pig acellular dermis was evaluated. The following values (total polyphenols and anthocianins) were obtained: a) Larrea divaricata: 58,77 + 1,55 mg gallic acid / 100 g fresh weight; 400,95 + 9,55 mg cianydin 3- glucosyde / 100 g fresh weight; respectively; b) porcine acellular dermis: 8,86 + 0,55 mg gallic acid / 100 g fresh weight and 0,10+ 0,00 mg cianydin 3-glucosyde / 100 g fresh weight; respectively, c) L. divaricata absorbed in porcine acellular dermis: 45,92 + 0,90 mg gallic acid / 100 g fresh weight and 155,92 + 5,90 mg cianydin 3-glucosyde / 100 g fresh weight, respectively. We concluded that it is possible to get a porcine acellular dermis loaded with antioxidants from Larrea divaricata for medical purposes.

KEY WORDS: Polyphenols; Anthocianins; Epidermal matrix; Larrea divaricata; Antioxidants.

Artículo | Referencias

INTRODUCCIÓN

La dermis o matriz acelular es tejido dérmico sin elementos celulares. Se emplea en la cicatrización de heridas. Las matrices dérmicas acelulares de mamíferos son inmunológicamente inertes, por no tener elementos celulares que generen rechazo de injerto 1. El género Larrea (Zygophyllaceae) está presente en todo el continente americano 2. En la región de la estepa patagónica existen cuatro especies de este género, vulgarmente conocidas como “jarilla”. Estas plantas tienen múltiples aplicaciones medicinales, siendo importante el uso dermatológico para la curación de lesiones cutáneas traumáticas, diversos tipos de dermatitis, así como antiséptico y antimicótico tópico 3. Los antioxidantes flavonoides y lignanos son abundantes en sus hojas (Fig 1) 4,5,6.



Fig 1: Larrea divaricata cultivad vitro (A). Antioxidantes (ácido Nordihidroguayarético) (B) presente en la parte aérea de L. divaricata 6.

El objetivo del trabajo fue cargar con extractos antioxidantes de Larrea divaricata una dermis acelular porcina (Sus Scrofa) para propósitos terapéuticos.

MATERIALES Y MÉTODOS

Larrea divaricata fue cultivada in vitro en el Laboratorio de Propagación Vegetativa del Asentamiento Universitario de San Martín de los Andes, Universidad Nacional del Comahue. Los cultivos se iniciaron a partir de ápices de plántulas obtenidas por germinación in vitro en un medio de Murashige & Skoog 7 suplementado con 6 – bencil amino purina (2,219 μM) y ácido naftalén acético (0,053 μM) e incubados en cámara de cultivo bajo luz fluorescente (45 μmol photon m-2 s-1 ), a 25-28 °C, fotoperíodo de 16:8 (Fig 1). Las semillas fueron suministradas por la Cátedra de Botánica General de la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional del Comahue. La dermis acelular porcina (Sus Scrofa) esterilizada por radiación gama se obtuvo de acuerdo a la metodología seguida por Drago y col 1.
Para la determinación de antocianinas y polifenoles, en dermis acelular porcina en presencia de Larrea divaricata, se procedió de la siguiente forma: 2g de dermis acelular porcina se homogeneizaron con 0,5 g de la parte aérea del cultivo in vitro de Larrea divaricata con Metanol- HCl (95:5; v:v). Los homogenatos se centrifugaron a 5000 x g, durante 30 minutos a 5°C. El contenido de polifenoles totales se determinó en los sobrenadantes de centrifugación, empleando el reactivo de Folin – Ciocalteau y solución de Na2 CO3. Las antocianinas se cuantificaron por pH diferencial según la técnica descripta por Benvenutti y col 8 y Giusti y Wrolstad 9. En ambos casos se midió la absorbancia empleando un espectrofómetro Beckman serie D500.
Asimismo, se determinaron los polifenoles totales y antocianinas en: dermis acelular porcina (2,0 g) y en parte aérea del cultivo in vitro de Larrea divaricata (0,5 g) respectivamente. Los análisis estadísticos se realizaron con todos los datos, empleando un diseño experimental completamente aleatorizado. Los datos fueron sometidos a un análisis de varianza (ANOVA) y para detectar diferencias se usó la prueba de Tukey HDS (p<0,05).

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Larrea divaricata enriqueció con antioxidantes la dermis acelular porcina (Tabla I). Si bien aumentó el contenido de polifenoles totales (52 veces), las antocianinas superan ese incremento (4724 veces).


(*) Expresados en mg de ácido gállico / 100 g de peso fresco.
(**) Expresados en mg de cianidina 3-glucósido / 100 g de peso fresco.

En las condiciones de trabajo, la dermis acelular cargó el 78% y 39% de polifenoles totales y antocianinas de Larrea divaricata, respectivamente (Tabla I).
En los procesos de reparación de cutánea los antioxidantes juegan un papel destacado, aumentando la proliferación de fibroblastos 10. Por lo que en la curación de heridas profundas, el empleo de la dermis acelular cargada con polifenoles y antocianinas de Larrea divaricata, podrían estimular y/o proteger a las células sembradas o aplicadas en finas láminas de autoinjerto con fines terapéuticos.

AGRADECIMIENTO

Se agradece la colaboración en las determinaciones químicas de la Lic. Karina Lobasso.

REFERENCIAS

1. Mansilla E, Arrua J, Salas E, Gardiner C, Marchessi N, Manfredi D, Schreiner A, Mosquera R, Gil MA, Gardenal L, Ball Lima M, Marin G, Drago H, Sturla F, Menna ME, Sorratti C y Piccinelli G. The Derma Project: present and future possibilities of skin procurement for the treatment of large burns in Argentina, Tissue Engineering and the Cadaver Skin Bank. Transplant Proc 2001; 33 (1-2): 637- 639. PMID: 11266994 [PubMed – indexed for MEDLINE].

2. Lourteig A. Zygophyllaceae. In: M N Correa. Flora Patagónica. Parte V. Dicotyledones dialipétalas (Oxalidaceae a Cornaceae). Colección científica del I.N.T.A, BuenosAires. 1988; 50-54.

3. Ratera EL y Ratera MO. Plantas de la Flora Argentina empleadas en medicina popular. Editorial Hemisferio Sur. Argentina. 1980; 122-175.

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5. Anesini C, Turner S y Borda E. Effect of Larrea divaricata Cav. extract and nordihydroguaiaretic acid upon peroxidase secretion in rat submandibulary glands. Pharmacol Res 2004; 49 (5): 441- 448.

6. Meyer GE, Chesler L, Liu D, Gable K, Maddux BA, Goldenberg DD, Youngren JF, Goldfine ID, Weiss WA, Matthay KK y Rosenthal SM. Nordihydroguaiaretic acid inhibits insulin-like growth factor signaling, growth, and survival in human neuroblastoma cells. J Cell Biochem 2007; 7 [Epub ahead of print].

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9. Giusti MM y Wrolstad RE. Characterization and measurement of anthocianins by UV-Visible spectroscopy. In: Wrolstad RE y col Editores. Current protocols in food analytical chemistry. New York: John Wiley and Sons. 2001; 1-13.

10. Thang PT, Patrick S, Teik LS y Yung CS. Anti-oxidant effects of the extracts from the leaves of Chromolaena odorata on human dermal fibroblasts and epidermal keratinocytes against hydrogen peroxide and hypoxanthine-xanthine oxidase induced damage. Burns 2001; 27 (4): 319-27.

Referencias

REFERENCIAS

1. Mansilla E, Arrua J, Salas E, Gardiner C, Marchessi N, Manfredi D, Schreiner A, Mosquera R, Gil MA, Gardenal L, Ball Lima M, Marin G, Drago H, Sturla F, Menna ME, Sorratti C y Piccinelli G. The Derma Project: present and future possibilities of skin procurement for the treatment of large burns in Argentina, Tissue Engineering and the Cadaver Skin Bank. Transplant Proc 2001; 33 (1-2): 637- 639. PMID: 11266994 [PubMed – indexed for MEDLINE].

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